LC-MS定量分析流程
准备工作:查阅文献、资料,获得目前化合物的分子式、结构式、溶解度等详细信息。
例如:维拉帕米:C27H38N2O4
离子的质荷比,m/z 第一步,确定母离子的质荷比 Q1 Scan
使用50%的甲醇水溶液配置适当浓度的标准溶液,激活Mass Only,双击运行Manual Tuning,使用针泵,以恒流方式进样。根据待测化合物性质,选择分析的极性,离子化方式。使用Q1 Scan确定母离子的质荷比,准确到小数点后一位,控制适当的浓度,尽可能使目标物的质谱峰响应值在1e6-3e6 cps之间。
第二步,确定子离子的质荷比 Product Ion Scan
得到高质量的MS2图:设定CE初始值为5eV,以5eV为步长手动调节CE,母离子的强度为图谱中基峰强度的1/3到1/4为宜。可适当平滑后选择至少2-3个子离子,质荷比确定到小数点后一位。
第三步,优化化合物参数,MRM
根据前面选出的母、子离子,组建MRM离子对,选择多个离子对时,应合理分配每一对的分析时间,建议100 ms。用“Ramp”优化CE(Collision Energy)与DP(Declustering Potential),以得到的参数初步建立MRM方法。
第四步,采样方法建立
点击MRM列表区域,将优化得到的DP和CE参数输入Compound页下。关掉所有质谱分析界面,激活液相色谱、质谱设备。单击Acquire中Build Acquire Method,打开上面保存过的MRM方法,添加设备:色谱泵。设置色谱同步,设置液相色谱条件(流速、梯度、柱温、进样参数等等)。
第五步,色谱条件优化,LC-MRM
接好并平衡色谱柱,用适当浓度标准品考察分离情况,根据色谱分离情况,设定梯度洗脱。MRM方式可以不必所有峰都基线分离,但要注意避开基质的干扰。调整色谱流动相组成和流速,并相应调整源参数。
第六步,优化Source参数,FIA-MRM
将前面用过的样品溶液稀释10倍,在第四步中建立的LC-MRM方法中,修改以下液相参数,另存为FIA-MRM方法。
? 采样时间1 min
? 50%有机相/水等度洗脱
? 用两通替换色谱柱
在Tune项下,双击Compound Optimization,选择FIA分析,根据向导进行自动优化,完成自动优化后,系统自动生成一个新的采样方法,建新方法中的参数替代旧方法即可。
附件下载: